相信经常在实验室做色谱分析的人都会有这样的经验:在绝大多数情况下,如果建立一个新的色谱方法(例如扩项),色谱图往往不会“一帆风顺",总会出现一些奇奇怪怪的状况——要么没有保留,要么分离度不够,要么峰形难看,要么响应很差等等。
对于这种问题,我们要像老中医一样,望闻问切,对症下药。但要做到这一点,就需要了解现象背后的成因。今天,作者结合自己的经验,来分享一下前延峰的成因。因为这种现象可以说是“一果多因",不找出对应的成因,往往难以解决。
前延峰的特点是峰的前沿平缓,后沿陡峭,看起来像被向前“拉扯",有时也会在前面出现“小包"。



2. 溶剂效应
溶剂洗脱强度过强,也是导致前延峰的重要原因。
例如初始流动相水相比例较高,而定容液为纯甲醇或乙腈时,在进样过程中,由于样品溶剂洗脱能力更强,样品液滴前端的分子会被优先洗脱,几乎不被保留,因而“跑得更快"。
当强溶剂被流动相稀释后,保留能力恢复正常,后续分子才被正常保留,从而形成前延峰。
这种情况通常表现为:主峰前出现一个隆起的“小包",且前延程度与定容液和初始流动相之间的极性差异有关。
降低溶剂效应的常见方法包括:
· 减少进样体积
· 降低强溶剂在流动相中的比例
· 使用溶剂效应消除器
3. 色谱柱问题
当色谱柱发生填料塌陷,或“先天性"填充不均匀时,会导致固定相表面的活性位点分布不均(某些部位对样品吸附能力变弱),从而产生非线性吸附。
当进样浓度较高时,这些位点容易达到吸附饱和。此时,目标物在该吸附位置会分为两部分:被吸附部分和饱和部分。显然,饱和部分会“走得更快"。
如果被吸附部分的浓度(或摩尔数)大于饱和部分,则被吸附部分成为峰的主体,饱和部分形成峰前延;反之,如果被吸附部分浓度更低,则饱和部分成为峰的主体,这种情况会形成拖尾峰。针对这种情况,最直接的方法就是更换色谱柱。
